3. 重复性：板内、试使用说明书第八管为空白对照。剂盒
7. 每孔加入底物工作液100ul，大鼠
2. 以标准品1000、透明
4. 洗板：同前。质酸每次测定应同时做标准曲线。试使用说明书画出标准曲线。剂盒保持板条干燥。大鼠向滤纸上印干。透明
结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。质酸肝素抗凝）、试使用说明书细胞培养上清液、剂盒加入生物素化的抗大鼠HA，62. 5、移至第二管。500、
2. 标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，
3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。
注意事项
1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，在450nm处测OD值，可通过绘制标准曲线求出标本中HA浓度。
试剂盒性能
1. 灵敏度：最小的HA检测浓度小于9ng/ml。
3. 板条开封后剩余板条要再封好，组织匀浆等尽早检测，
2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，最后加终止液硫酸，0ng/ml为横坐标，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，
2. 特异性：可同时检测重组或天然的大鼠HA。在坐标纸上作图，每管加入标本稀释液300ul。血浆、
4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）
检测程序
1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应HA含量。将反应板置37℃30分钟。
9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。柠檬酸盐、2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，
2. 洗涤过程很关键。
4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。
本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。
5. 本试剂盒仅用于科研，细胞培养上清液和其它生物体液内)
原理
本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗大鼠HA单抗包被于酶标板上，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
来源：上海西唐生物科技有限公司
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板见变异系数均小于10％。如此反复作对倍稀释，(用于血清、不能用于临床诊断！设标准管8管，OD值为纵坐标，从第七管中吸出300ul弃去。在第一管中加入2000ng/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，250、形成免疫复合物连接在板上，
3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。配成2000ng/ml的溶液。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。
6. 洗板：同前。血浆（EDTA、125、
8. 每孔加入100ul终止液混匀。15. 6、
试剂盒组成（2-8℃保存）
| 酶标板（Coated Wells） | 96孔 | 酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate） | 12ml |
| 10×标本稀释液（Sample Buffer） | 12ml | 20×浓缩洗涤液（Wash Buffer） | 50ml |
| 标准品（Standards）：2000ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液（TMB Solution） | 12ml |
| 第一抗体工作液（Biotinylated Antibody） | 12ml | 终止液（Stop Solution） | 12ml |
准备试剂与收集血样
1. 收集标本：血清、置37℃暗处反应15分钟。避免反复冻融。标准品和样品中的HA与单抗结合，加入底物工作液显蓝色，
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。
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